Meine Transformationen haben funktioniert!
Auf fast allen meiner Platten sind Transformanten gewachsen. Es sollten eigentlich nur diejenigen wachsen, die das Plasmid richtig drinnen haben. Warum? Weil die drei Bausteine meiner Ligation nicht-kompatible sticky ends haben. Auf dem Rückgrat des Vektors ist eine Amp-Resistenz. Nur wenn sich die sticky ends richtig zusammenfügen, ist der Vektor komplett, kann aufgenommen und abgelesen werden. Nur dann können sie auf Amp wachsen. Zumindest in der Theorie.
In der Praxis schaut das schon wieder anders aus. Mein Kollege Mark hatte eine Erfolgsrate von ca einem Transformanten in 20. Ich habe meinen Vektor nicht dephosphoryliert, dachte mir aber, es ist in diesem Fall egal, da er nicht religieren sollte, weil die Enden nicht kompatibel sind.
Um zu prüfen, ob meine Viecherl das Konstrukt haben, musste daher wieder eine Colony-PCR gemacht werden. Am Montag werde ich sie auf ein Gel laden, dann kommt die Stunde der Wahrheit...
Hier in Wageningen gibt es tolle Veranstaltungen zur 750-Jahr-Feier. Gleich neben meinem Haus ist ein kleiner Kirtag mit Zuckerwatte, Hochschaubahnen, Autodrom... Fotos folgen!
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